Zu viel Vorlage in pcr

Die Menge an Gesamt-DNA in einer PCR hat einen deutlichen Einfluss auf das Ergebnis eines PCR-Verfahrens. Die Verwendung von zu viel Gesamt-DNA führt zu gepackter DNA auf engstem Raum des Reaktionsgefäßes und kann aufgrund der behinderten Diffusion großer Taq-Polymerase-Moleküle zu einem falschen Priming und sogar einer schlechten DNA-Synthese führen.

1. Wie viel Vorlage soll ich zur PCR hinzufügen??
2. Kann zu viel Primer die PCR hemmen?
3. Was kann dazu führen, dass eine PCR-Reaktion fehlschlägt??
4. Wie viel DNA reicht für die PCR?

Wie viel Vorlage soll ich zur PCR hinzufügen??

Obwohl theoretisch ein Molekül der Matrize ausreichen würde, werden für eine klassische PCR typischerweise deutlich größere DNA-Mengen verwendet, zum Beispiel bis zu 1 µg genomische Säuger-DNA und nur 1 pg Plasmid-DNA (1).

Kann zu viel Primer die PCR hemmen?

Verunreinigungen im dNTP-Mix können zu unvollständiger oder falscher Amplifikation oder PCR-Hemmung führen. Verwenden Sie hochwertige dNTPs. Die Verwendung einer übermäßigen Konzentration von Primern kann die Wahrscheinlichkeit erhöhen, dass Primer unspezifisch an unerwünschte Stellen auf der Matrize oder aneinander binden.

Was kann dazu führen, dass eine PCR-Reaktion fehlschlägt??

Das Vergessen nur einer Komponente der PCR-Reaktion, sei es die DNA-Polymerase, Primer oder sogar die Template-DNA, führt zu einer fehlgeschlagenen Reaktion. Die einfachste Lösung besteht darin, die Reaktion zu wiederholen. ... Wenn danach immer noch kein PCR-Produkt vorhanden ist, besteht die Möglichkeit, dass etwas anderes Ihre Reaktion behindert.

Wie viel DNA reicht für die PCR?

In einer typischen 50-µl-Reaktion reichen 1–2 Einheiten DNA-Polymerase für die Amplifikation der Ziel-DNA. Bei schwierigen Templaten kann es jedoch erforderlich sein, die Enzymmengen anzupassen. Wenn beispielsweise Inhibitoren in der DNA-Probe vorhanden sind, kann eine Erhöhung der DNA-Polymerase-Menge die PCR-Ausbeuten verbessern.