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Stattdessen müssen die PCR-Bedingungen optimiert werden; Berücksichtigen Sie bei der Anpassung der PCR-Bedingungen Folgendes:
- Reduzieren Sie die Menge der Vorlage.
- Erhöhen Sie die Glühtemperatur.
- Touchdown-PCR verwenden.
- Reduzieren Sie die Anzahl der PCR-Zyklen.
- Neugestaltung der Primer.
- Verwenden Sie verschachtelte Primer.
- Das Produkt erneut verstärken.
- Warum funktioniert meine PCR nicht??
- Wie optimiert man PCR-Bedingungen?
- Was verursacht Verschmieren bei der PCR?
- Woher wissen Sie, ob die PCR kontaminiert ist??
Warum funktioniert meine PCR nicht??
Das Vergessen nur einer Komponente der PCR-Reaktion, sei es die DNA-Polymerase, Primer oder sogar die Template-DNA, führt zu einer fehlgeschlagenen Reaktion. Die einfachste Lösung besteht darin, die Reaktion zu wiederholen. ... Wenn danach immer noch kein PCR-Produkt vorhanden ist, besteht die Möglichkeit, dass etwas anderes Ihre Reaktion behindert.
Wie optimiert man PCR-Bedingungen?
PCR-Bedingungen
- Verwenden Sie höhere Denaturierungstemperaturen (e.g., 98 °C im Gegensatz zu 94 °C oder 95 °C), um eine vollständige Denaturierung des Templates zu ermöglichen.
- Halten Sie die Annealing-Zeiten für GC-reiche Templates so kurz wie möglich.
- Verwenden Sie Primer mit einem höheren Tm (>68 °C), da bei höherer Temperatur geglüht werden kann.
Was verursacht Verschmieren bei der PCR?
DNA-Kontamination, RNA in DNA-Probe, hohe DNA-Konzentration in der PCR-Reaktion kann zu Verschmieren führen. ... DNA-Verschmierung, die normalerweise in Pflanzen durch eine hohe Konzentration an Template-DNA verursacht wird.
Woher wissen Sie, ob die PCR kontaminiert ist??
Um die Lösung auf Kontamination zu überprüfen, stellen Sie negative Kontrollreaktionen mit neuen Reagenzien zusammen, von denen bekannt ist, dass sie nicht kontaminiert sind, und fügen Sie jeder Reaktion eine der verdächtigen Lösungen hinzu. Diese Reaktion zeigt amplifizierte Produkte, die auf eine Kontamination hindeuten, ist ein Beweis dafür, dass die hinzugefügte Lösung kontaminiert war.
