Verstärkungsprobleme

1. Welche Probleme können bei der PCR-Amplifikation auftreten??
2. Warum gibt es bei der PCR keine Amplifikation??
3. Was verursacht die Amplifikation bei der PCR?
4. Was verursacht PCR-Versagen??

Welche Probleme können bei der PCR-Amplifikation auftreten??

Viele der häufigsten Probleme bei PCR und RT-PCR werden während der Agarosegelelektrophorese der Reaktionsprodukte identifiziert. Dazu gehören das Fehlen des erwarteten Amplifikationsprodukts, das Vorhandensein unspezifischer Produkte, übermäßiges Verschmieren und das Vorhandensein einer „Primer-Dimer“-Bande.

Warum gibt es bei der PCR keine Amplifikation??

DNA-Polymerase-Enzym funktioniert nicht

Das DNA-Polymerase-Enzym ist für die Verlängerung der gebundenen Primer entlang der DNA-Matrizenstränge verantwortlich. Wenn dieses Enzym nicht mehr so ​​effizient ist, möglicherweise aufgrund von Einfrieren und Auftauen, ist der Verlängerungsschritt während der PCR-Reaktion unvollständig, sodass Sie kein PCR-Produkt erhalten.

Was verursacht die Amplifikation bei der PCR?

Basis-PCR. Das PCR-Verfahren wurde ursprünglich entwickelt, um kurze Abschnitte eines längeren DNA-Moleküls zu amplifizieren (Saiki et al. 1985). Eine typische Amplifikationsreaktion umfasst Ziel-DNA, eine thermostabile DNA-Polymerase, zwei Oligonukleotid-Primer, Desoxynukleotid-Triphosphate (dNTPs), Reaktionspuffer und Magnesium.

Was verursacht PCR-Versagen??

Normalerweise geben Forscher als erstes einem fehlerhaften Enzym oder Reagenz die Schuld, wenn ein Experiment fehlschlägt, aber bei der PCR ist dies weniger wahrscheinlich die Ursache für das Scheitern. Häufiger sind tiefere interne Probleme wie Primer-Design, Thermocycler-Parameter oder unspezifische Bindung an andere Template-Sequenzen die Ursache.